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HPLC法测定保健品中合成色素的分析方法

文档作者：梁伟郭菊玲李波张琦惠刘庚文档来源：云南省玉溪市食品药品检验所		点击数：	更新时间： 2025年06月08日
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Oct 2015 CHINA FOOD SAFETY 111
分析与检测
合成色素主要是指人工化学合成
方法所制得的有机色素，主要是以煤
焦油为原料中分离出来的苯胺染料为
原料制成的，对人体有害，危害包括
一般毒性、致泻性、致突变、及致癌
作用。在很长的一段时间里，由于人
们没有认识到合成色素的危害，并且
合成色素与天然色素相比较，具有色
泽鲜艳、着色力强、性质稳定和价格
便宜等优点，许多国家在食品加工行
业普遍使用合成色素。目前我国批准
使用的合成色素有6 个品种，即苋菜红、
胭脂红、柠檬黄、日落黄、靛蓝和亮蓝。
事实上，在巨大的经济利益的驱使下，
我国食品中合成色素的超标、超范围
使用现象屡见不止。
仪器与试药
Alient 12600 高效液相色谱仪，
配有DAD 检测器、自动进样器和安捷
伦1260 工作站；Alient Cary-40 紫外
分光光度计，AEL-200 型电子天平，超
声仪。柠檬黄(GBW(E)100158 北京海岸
鸿蒙1 mg/ml）、日落黄(GBW(E)100159
北京海岸鸿蒙1 mg/ml）、苋菜红
(GBW(E)100160 北京海岸鸿蒙1 mg/
ml）、胭脂红(GBW(E)100161 北京海
岸鸿蒙1 mg/ml）、新红(SB05-219-
2008 农业部环境保护科研监测所100
ug/ml)、赤藓红(GBW(E)100163 北京海
岸鸿蒙1 mg/ml）、亮蓝(GBW(E)100162
北京海岸鸿蒙1 mg/ml）、靛蓝
(10716-201111 98.3% 中国食品药品
检定研究院）。甲醇色谱纯，超纯水，
乙酸铵分析纯。
色谱条件
采用Z O R B A X S B - C 1 8
（4.6mm×250mm 5μm），流动相：甲
醇—乙酸铵溶液（PH=4,0.02 mol/L），
柱温：30℃，柱流速:1.00 ml/min，进
样量为10μl（见表1）。
溶液的制备
对照品溶液。分别精密量取上述对
照品溶液柠檬黄0.10 ml、日落黄0.10
ml、苋菜红0.10 ml、胭脂红0.10 ml、
新红2.50 ml、赤藓红0.10 ml、亮蓝0.10
ml、靛蓝0.10 ml，同置5 ml 容量瓶中，
加PH 值6 的水稀释至刻度，摇匀。
供试品溶液的制备。采用液—液
分配法进行提取，浓缩，定容。
方法学考察
专属性考察 取各对照品单标溶液，
用紫外分光光度计在800nm-200nm 波
长范围进行扫描，记录图谱结果：柠檬
黄的最大吸收波长为:430 nm、日落黄
的最大吸收波长为:480 nm、苋菜红的
最大吸收波长为：520 nm 及215 nm、
胭脂红的最大吸收波长为：505 nm 及
215 nm 、新红的最大吸收波长为：505
nm 及235 nm 、赤藓红的最大吸收波长
为：525 nm、亮蓝的最大吸收波长为：
630 nm、靛蓝的最大吸收波长为：675
nm 及295 nm。为了区分各合成色素的
紫外吸收波长，使其便于分开，选择柠
檬黄检测波长430 nm、日落黄检测波
长480 nm、苋菜红检测波长520 nm、
胭脂红检测波长505 nm、新红检测波
长505 nm、赤藓红检测波长525 nm、
亮蓝检测波长630 nm、靛蓝检测波长
675 nm。
精密度考察 仪器重复性 采用上
述不同波长多通道检测，连续重复进
样5 针，记录色谱图。浓度为20μg/
ml， 柠檬黄峰面积为：874.90588、
874.36664、874.27808、873.77386、
873.82758,RSD 为0.1%，日落黄峰面积
为583.32092、582.85150、583.20679、
582.54541、582.67517，RSD 为
0.1%、苋菜红峰面积为515.29663、
514.94006、515.38654、515.02313、
514.94751，RSD 为0.1%， 胭脂红
峰面积为495.16882、495.15695、
495.31964、494.88983、494.94214，
RSD 为0.1%， 赤藓红峰面积为
974.24695、974.27136、974.69141、
973.86969、973.83759，RSD 为
0.1%， 亮蓝峰面积为1366.12866、
1362.6394、1365.46802、1365.13684、
1367.81079，RSD 为0.1%，靛蓝峰面积
为107.31249、107.59335、107.2607、
107.79092、107.6981，RSD 为0.3%，
浓度50μg/ml， 新红对照品溶液峰
面积为1520.22107、1519.95789、
1520.35364、1518.823、1520.13965，
RSD 为0.2%。考察仪器的精密度，表明
仪器精密度良好。
讨论
本文对GB/T5009.35-2003《食品中
合成着色剂的测定》采用高效液相色
谱法单波长（254 nm）测定法检测进
行比较，故采用梯度洗脱、多波长同
时检测8 种合成着色剂，排除单波长
检测时合成色素的相互干扰，快速、
简便、准确率高、能更好满足于食品
中合成着色剂的分析检测，具有较高
的实际应用价值。
作者简介：梁伟（1981.1）男，云南，
江川，大学本科，主管药师。研究方向：
食品药品检验检测。
HPLC 法测定保健品中合成色素的分析方法
□梁　伟　郭菊玲　李　波　张琦惠　刘　庚　云南省玉溪市食品药品检验所
表1　梯度洗脱程序
时 间(min) 甲 醇（%） 乙酸铵溶液（%）
0 ～ 5.00 20 → 35 80 → 65
5.00 ～ 12.00 35 → 98 65 → 2
12.00 ～ 18.00 98 → 2 2 → 98
18.00 ～ 19.00 98 → 2 2 → 98
19.00 ～ 25.00 20 → 80 80 → 20

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