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超高效液相色谱法测定米豆腐中偶氮甲酰胺含量

文档作者：雷德卿文档来源：湖南省株洲市食品药品检验所		点击数：	更新时间： 2025年06月25日
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第8 卷 第9 期 食品安全质量检测学报 Vol. 8 No. 9
2017 年9 月 Journal of Food Safety and Quality Sep. , 2017
*通讯作者: 雷德卿, 副主任药师, 主要研究方向为食品、药品、保健食品、化妆品检验与质量标准研究。E-mail: 53829816@qq.com
*Corresponding author: LEI De-Qing, Associate Chief Pharmacist, Zhuzhou Institute for Food and Drug Control of Hunan Province, No.42 culture
lane, Zhuzhou 412008, China. E-mail: 53829816@qq.com
超高效液相色谱法测定米豆腐中偶氮甲酰胺含量
雷德卿*
(湖南省株洲市食品药品检验所, 株洲 412008)
摘 要: 目的 建立超高效液相色谱法测定米豆腐中偶氮甲酰胺含量。方法 使用超高效液相色谱法进行测
定, 色谱条件为: 色谱柱: Waters C18(150 mm×2.1 mm, 5 μm), 流动相: 水-甲醇(90:10, V:V), 流速: 0.3 mL/min,
检测波长: 275 nm, 柱温: 30 ℃。结果 偶氮甲酰胺的色谱峰形对称, 并能与其他物质完全分离; 在
14.98~149.8 ng 范围内线性关系良好, 相关系数r=0.9991(n=6); 方法检出限为0.5 μg/g, 方法定量限为1.6 μg/g,
平均加标回收率为98.0%, 相对标准偏差3.5% (n=3)。结论 该方法前处理简单、快速, 定量准确, 灵敏度高,
可用于检测米豆腐中偶氮甲酰胺含量。
关键词: 米豆腐; 偶氮甲酰胺; 超高效液相色谱
Determination of azodicarbonamide in rice Doufu by ultra performance
liquid chromatography
LEI De-Qing*
(Zhuzhou Institute for Food and Drug Control of Hunan Province, Zhuzhou 412008, China)
ABSTRACT: Objective To establish the method for determination of azodicarbonamide in rice Doufu by ultra
performance liquid chromatography (UPLC). Methods UPLC was used for determination, and the chromatographic
conditions were as follows: analytical column was Waters C18 (150 mm×2.1 mm, 5 μm), the mobile phase consisted
of water–methanol (90:10, V:V), the flow rate was 0.3 mL/min, the detection wavelength was 275nm, and column
temperature was 30 ℃. Results The chromatography peak of azodicarbonamide was symmetry and completely
separated from the other ingredients, and it showed a good linear relationship in the range of 14.98~149.8 ng, with
correlation coefficient (r) of 0.9991 (n=6). The limit of detection (LOD) was 0.5 μg/g, and the limit of quantitation
(LOQ) was 1.6 μg/g. The average recovery was 98.0% with RSD of 3.5% (n=3). Conclusions The established
method is simple, rapid, accurate and sensitive, which can be used for the determination of azodicarbonamide in rice
Doufu.
KEY WORDS: rice Doufu; azodicarbonamide; ultra performance liquid chromatography
1 引 言
偶氮甲酰胺(azodicarbonamide, ADA)是一种白色或淡
黄色粉末, 在工业中常用作发泡剂, 可用于瑜伽垫、橡胶
鞋底等生产, 以增加产品的弹性, 也用于食品工业, 增加
食品的强度和柔韧性[1]。偶氮甲酰胺能诱导哮喘及其他呼
吸道症状的发生; 降解产物氨基脲对心脏、肝脏和肾脏有
一定的损伤作用, 有致癌、致畸作用, 对雄性小鼠有致不
育作用[2-4]。GB 2760-2014《食品安全国家标准 食品添加
剂使用标准》仅允许小麦粉可以添加偶氮甲酰胺[5], 最大
万方数据
3580 食品安全质量检测学报 第8 卷
使用量为0.045 g/kg。米豆腐是川、湘、黔、鄂地区著名
的地方小吃, 润滑鲜嫩、清新舒爽, 深受人们喜爱。一些
生产商在米豆腐中添加偶氮甲酰胺, 可以增加米豆腐的韧
性, 便于保存和提高口感。我国目前没有米豆腐的检验标
准, 也没有相关文献资料。为加强米豆腐质量控制, 保障
食品安全, 急需建立米豆腐的质量标准。参考关于偶氮
甲酰胺检测的研究文献[6-16], 对米豆腐中偶氮甲酰胺的
提取和检验方法进行研究, 为米豆腐的监督检验提供科学
依据。
2 材料与方法
2.1 仪器与试剂
Agilengt 1290 超高效液相色谱仪, 配DAD 检测器、
自动进样器(美国安捷伦公司); MS205DU 电子天平(梅特
勒-托利多仪器(上海)有限公司生产)。
甲醇(色谱纯, 批号150615, 国药集团), 超纯水, 二
甲基亚砜(分析纯, 201601003, 湖南汇虹试剂有限公司)。偶
氮甲酰胺对照品(纯度为99.0%, 美国Sigma 公司)。米豆腐
样品从市场上购买, 共31 批, 分别编号为1 号至31 号。
2.2 色谱条件
色谱柱: Waters C18(150 mm×2.1 mm, 5 μm), 流动相:
水-甲醇(90: 10, V:V), 流速: 0.3 mL/min, 检测波长: 275 nm,
柱温: 30 ℃, 进样量: 3 μL。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取偶氮甲酰胺对照品0.02522 g, 置于25 mL
量瓶中, 加30%二甲亚砜溶液溶解并稀释至刻度, 摇匀,
作为对照品贮备液。精密量取贮备液2 mL, 置100 mL 量
瓶中, 加30%二甲亚砜溶液稀释至刻度, 摇匀, 作为对照
品溶液。
2.4 样品溶液的制备
取经筛查含偶氮甲酰胺的样品适量粉碎, 混匀, 取约
10 g, 精密称定, 置50 mL 离心管中, 加30%二甲亚砜溶液
30 mL, 漩涡混旋1 min, 50 ℃水浴30 min, 离心, 取上清
液。残渣加30%二甲亚砜溶液20 mL, 漩涡混旋1 min, 离
心, 取上清液, 重复上述操作一次。合并上清液, 水浴蒸至
近干, 用30%二甲亚砜溶液溶解并定容至20 mL, 摇匀,
作为供试品溶液。
2.5 阴性对照溶液的制备
取经筛查不含偶氮甲酰胺的样品, 按样品溶液制备
方法制备阴性对照溶液。
2.6 线性与范围
精密量取上述贮备液0.5、1、2、3、4、5 mL, 分别
置100 mL 量瓶中, 加30%二甲亚砜溶液稀释至刻度, 摇
匀。分别精密吸取3 μL 注入液相色谱仪, 各进样2 次, 测
定峰面积, 以偶氮甲酰胺浓度为横坐标, 相应峰面积平均
值为纵坐标绘制标准曲线。
2.7 精密度试验
取同一份偶氮甲酰胺对照品溶液, 连续进样6 次, 测
定峰面积, 计算精密度。
2.8 稳定性试验
分别精密吸取同一样品溶液3 μL, 于0、6、12、24、
36 h 各进样2 次, 以峰面积平均值计算RSD。
2.9 检出限与定量限
取经检测不含偶氮甲酰胺的样品约10 g, 精密称定,
精密加入5.044 μg/mL 的偶氮甲酰胺对照品溶液2 mL, 精
密吸取3 μL, 注入液相色谱仪, 测定信噪比(S/N)。按S/N=3
计算方法检出限, 按S/N=10 计算方法定量限。
2.10 回收率试验
精密称取已知含量的供试品适量( 含量为0.036
mg/g)9 份, 分别置50 mL 离心管中, 精密加入偶氮甲酰胺
对照品贮备液0.2、0.25、0.3 mL 各3 份。同2.4 项操作, 按
上述色谱条件测定偶氮甲酰胺的含量。
2.11 样品测定
取市场购买的31 批米豆腐样品, 照上述样品溶液制
备方法和色谱条件, 测定样品中氮甲酰胺。
3 结果与分析
3.1 专属性
取对照品、阳性样品及阴性样品溶液, 进样, 结果样
品中其他成分对偶氮甲酰胺无干扰, 阴性样品在目标峰附
近没有干扰成分(见图1), 专属性好。
3.2 线性与范围
得回归方程: Y=2.4015X+1.8170, r=0.9991(n=6)。偶氮
甲酰胺在14.98~149.8 ng 范围内线性关系良好。
3.3 精密度试验
取同一份偶氮甲酰胺对照品溶液, 连续进样6 次, 测
定峰面积, RSD%为0.4%(n=6)。
3.4 稳定性试验
以峰面积平均值计算RSD 为0.6%, 结果表明样品溶
液中待测成分在36 h 内稳定。
3.5 检出限与定量限
按S/N=3 计算方法检出限, 按S/N=10 计算方法定量
限, 结果方法检出限为0.5 μg/g, 方法定量限为1.6 μg/g。
万方数据
第9 期 雷德卿: 超高效液相色谱法测定米豆腐中偶氮甲酰胺含量 3581
图1 偶氮甲酰胺对照品(A)、样品溶液(B)和阴性对照(C)色谱图
Fig. 1 Chromatograms of azodicarbonamide reference substance
(A), rice Doufu (B) and blank (C)
3.6 回收率试验
计算偶氮甲酰胺的平均回收率为98.0%, RSD 为
3.5%(见表1)。
3.7 样品测定
结果26 批样品未检出, 5 号、14 号、15 号、27 号、
30 号等5 批样品检出偶氮甲酰胺(见表2)。
4 结论与讨论
4.1 提取方法优化
偶氮甲酰胺能溶于碱、热水、二甲亚砜, 不溶于大多
数有机溶剂和冷水。二甲亚砜黏稠性大, 加入样品中成糊
状, 难以分离。用水和乙腈提取样品中偶氮甲酰胺, 回收
率较高, 但干扰成分较多, 目标峰容易受到干扰。用丙酮
超声提取, 再用氮气吹干, 回收率较高, 干扰成分也较少,
但氮吹过程较麻烦, 操作繁琐。选用不同浓度二甲亚砜水
溶液提取米豆腐中偶氮甲酰胺, 考察回收率。结果显示
30%二甲亚砜较易与样品分离, 回收率高, 提取效果好,
且操作简单。
4.2 检测方法的进一步研究
UPLC 法简单、方便, 在上述色谱条件下, 偶氮甲酰
胺出峰时间约为4.5 min, 时间快, 峰形良好, 与其他成分
分离完全, 可用于该产品质量控制。检出偶氮甲酰胺的5
批样品, 保留时间和光谱指数图均与对照品一致, 经液相
色谱-质谱初步筛查, 其中4 批其一级质谱及二级质谱图均
与对照品一致, 可以确认添加了偶氮甲酰胺; 1 批(15 号样)
一级质谱图及二级质谱图与对照品不一致, 说明液相色谱
定性存在假阳性结果, 值得进一步研究优化液相色谱-质
谱联用法检测米豆腐中偶氮甲酰胺。
该方法前处理简单、快速, 定量准确, 灵敏度高, 可
用于检测米豆腐中偶氮甲酰胺含量。
表1 回收率试验结果 (n=3)
Table 1 Results of recovery tests (n=3)
编号 取样量(g) 样品含量(mg) 加入量(mg) 测得量(mg) 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%)
1 4.0827 0.1470 0.1997 0.3380 95.6
98.0 3.5
2 3.9839 0.1434 0.1997 0.3369 96.9
3 3.8533 0.1387 0.1997 0.3461 103.9
4 4.9665 0.1788 0.2497 0.4246 98.4
5 4.8921 0.1761 0.2497 0.4096 93.5
6 5.1036 0.1837 0.2497 0.4201 94.7
7 6.2203 0.2239 0.2996 0.5156 97.4
8 6.1018 0.2197 0.2996 0.5260 102.2
9 6.0032 0.2161 0.2996 0.5136 99.3
万方数据
3582 食品安全质量检测学报 第8 卷
表2 样品偶氮甲酰胺含量
Table 2 The content of azodicarbonamide in samples
编号 5 14 15 27 30
含量(mg/g) 0.036 0.015 0.0075 0.031 0.017
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(责任编辑: 武英华)
作者简介
雷德卿, 副主任药师, 主要研究方向
为食品、药品、保健食品、化妆品检验与
质量标准研究。

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