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2014年山东临沂地区花生真菌及黄曲霉毒素污染调查

文档作者：韩春卉, 韩小敏, 王伟, 张靖, 陈思瑶, 张宏元, 江涛, 徐进文档来源：国家食品安全风险评估中心卫生部食品安全风险评估重点实验室		点击数：	更新时间： 2025年06月17日
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第6 卷 第4 期 食品安全质量检测学报 Vol. 6 No. 4
2015 年4 月 Journal of Food Safety and Quality Apr. , 2015
基金项目: “十二五”科技攻关课题项目(2012BAK17B13)
Fund: Supported by the National Technique Foundation during the 12th Five-Year Plan Period (2012BAK17B13)
*通讯作者: 徐进, 研究员, 主要研究方向为食品微生物。E-mail: xujin@cfsa.net.cn
*Corresponding author: XU Jin, Researcher, Key Lab of Food Safety Risk Assessment, Ministry of Health, China National Centre for Food
Safety Risk Assessment No.7 Panjiayuan Nanli, Chaoyang District, Beijing 100021, China. E-mail: xujin@cfsa.net.cn
2014 年山东临沂地区花生真菌及黄曲霉
毒素污染调查
韩春卉, 韩小敏, 王 伟, 张 靖, 陈思瑶, 张宏元, 江 涛, 徐 进*
(国家食品安全风险评估中心卫生部食品安全风险评估重点实验室, 北京 100021)
摘要: 目的对山东临沂地区五个花生主产区2014 年花生真菌及黄曲霉毒素污染情况进行调查。方法 分
别采集收获前1 个月的花生和土壤样品和收获期、收获后贮藏1 个月及3 个月的花生样品, 花生和土壤真菌菌
相调查分别采用点种法和稀释法接种马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)平板, 于28±1 ℃培养5 d 后进行菌落计数并鉴定;
黄曲霉毒素含量采用高效液相色谱法测定。结果 临沂不同地区花生和土壤样品污染的真菌菌相不同, 土壤样
品真菌菌相较为丰富, 但黄曲霉(7%)及黄曲霉毒素(1%)侵染水平均较低。结论 山东临沂部分地区花生样品受
黄曲霉及黄曲霉毒素侵染较轻, 但仍需注意土壤中其他真菌污染。
关键词: 真菌; 黄曲霉; 黄曲霉毒素; 侵染; 花生
Survey on fungi and aflatoxin infection of peanut harvested in 2014 collected
from parts of Linyi district of Shandong province
HAN Chun-Hui, HAN Xiao-Min, WANG Wei, ZHANG Jing, CHEN Si-Yao,
ZHANG Hong-Yuan, JIANG Tao, XU-Jin*
(Key Lab of Food Safety Risk Assessment, Ministry of Health, China National Centre for Food Safety Risk Assessment,
Beijing 100021, China)
ABSTRACT: Objective To study the fungi and aflatoxin infection of shell peanuts harvested in 2014
collected from 5 regions in Linyi district, Shandong province. Methods Unshelled peanuts and soil samples
collected at 1 month before harvest, peanuts samples collected at harvest, 1 and 3 month after harvest from
different regions were inoculated onto PDA medium. The colony-forming unit of fungi germinated were
enumerated, classified and identified after incubation for 5 d at 28±1 ℃; aflatoxin was detected by high
performance liquid chromatography. Results The species of fungi isolated from peanut kernels and soil
varied from region to region, and the fungal species from soil were more various. While the invasion of peanut
kernels by Aspergillus flavus and aflatoxin was very low at the average percentage of 7% and 1%, respectively.
Conclusion The peanuts kernels collected from Linyi district of Shandong province were slightly infected by
Aspergillus flavus and aflatoxin, but the other fungi invasion still need to be taken.
KEY WORDS: fungi; Aspergillus flavus; aflatoxin; infection; peanut
1384 食品安全质量检测学报 第6 卷
1 引 言
黄曲霉毒素主要是由黄曲霉(Aspergillus flavus)
和寄生曲霉(A.paraticus)等产生的水溶性次级代谢产
物, 1993 年和2002 年世界卫生组织癌症研究机构两
次对其进行评价, 将其列为I 类致癌物(人类致癌
物)[1-3]。黄曲霉毒素主要污染粮油制品和动植物食品,
如花生、玉米、大米、小麦、豆类、坚果类、肉类、
乳及乳制品、水产品等。天然污染的黄曲霉毒素主要
是B 组和G 组, 代表性的毒素有AFB1、AFB2、AFG1
和AFG2
[4-6]。花生为我国重要的油料作物和经济作物,
其生长、收获、贮藏乃至加工过程中, 在温度和湿度
合适的情况下, 易受到黄曲霉侵染而产生黄曲霉毒
素。高秀芬等对中国部分地区花生样品中黄曲霉毒素
AFB1、AFB2、AFG1 和AFG2 的含量检测发现, 样品
中黄曲霉毒素的阳性率为58.38%, 平均浓度为91.74
μg/kg, 4 种毒素中AFB1 阳性率和平均浓度最高[7]。
黄曲霉毒素是我国食品安全污染物风险监测的
重要内容, 由其导致的粮食损失及潜在的致病风险
一直是我国面临的主要食品安全问题。在2012 年对
山东临沂五个地区花生主产区的收获花生和土壤样
品真菌污染水平及菌相分布研究的基础上[8], 本文继
续采用相同的方法对2014 年所调查的临沂地区花生
和土壤样品的真菌及黄曲霉毒素污染水平进行分析。
为我国食品安全污染物风险监测的花生样品黄曲霉
及黄曲霉毒素的污染控制提供技术支持。
2 材料与方法
2.1 材 料
2.1.1 样品来源
100 份花生样品和50 份土壤样品均于2014 年采
自山东临沂地区平邑县、沂南县、沂水县、莒南县、
临沭县五个花生主产区。
2.1.2 仪器与主要试剂
生化培养箱(上海一恒科学仪器有限公司)、生物
安全柜(北京东方照生科技有限公司)、15.0 cm 一次
性无菌培养皿(青岛金典生化器材有限公司)、玻璃试
管(海门海泰实验器材有限公司)、Waters600 高效液
相色谱系统(美国Waters 公司)、hypersil BDS C18 色
谱柱(大连依利特分析仪器有限公司)、Waters2475 荧
光检测器(美国Waters 公司)。
马铃薯葡萄糖琼脂培养基(北京三药科技开发公
司)、察氏培养基(Sigma 股份有限公司), 苯酚(国药集
团化学试剂有限公司)、乳酸(国药集团化学试剂有限
公司)、甘油(国药集团化学试剂有限公司)、甲醇(色
谱纯, 美国Fisher)、乙腈(色谱纯, 美国Fisher)、去离
子水(Millipore) 、黄曲霉毒素总量免疫亲和柱
(ROMER 国际贸易北京有限公司)、黄曲霉毒素混合
标准品AFB1、AFB2、AFG1、AFG2(中检维康生物技
术有限公司)、吐温-20(国药集团化学试剂有限公司)、
磷酸盐缓冲液(PBS, 北京索莱宝科技有限公司)。
2.2 方 法
2.2.1 样品采集
2014 年8 月~2014 年12 月在山东临沂地区的平
邑县、沂南县、沂水县、莒南县、临沭县5 个县区(10
个农户/县, 2 块地/农户), 分别采集收获前1 个月、收
获期、收获后贮藏1 个月和3 个月的花生样品, 每个
采集点各采集500 g 带壳花生样品。花生去壳后立即
装入高压灭菌的牛皮纸袋, 密封送至实验室检测。
土壤样品: 分别在上述采样地区的每块农田四
周及中央共5 个点取样, 取样深度为表层土下0~20
cm、每个点取50 g 土样, 混合后放入无菌采样袋中,
置4 ℃冰箱保存。
2.2.2 真菌分离及鉴定
花生样品: 花生去壳后取适量花生仁放入无菌
自封袋, 倒入75%乙醇浸泡消毒30 s 后, 弃去乙醇,
用无菌蒸馏水充分洗涤10 次, 每次1~2 min。以无菌
操作将经表面消毒除菌的花生样品胚部向下接种于
PDA 平板上, 每块平板5 粒, 每份样品共接种25 粒,
接种后的平板置 28 ℃±1 ℃培养 5 d~7 d 观察结果。
土壤样品: 以无菌操作取土壤样品25.0 g, 置
225.0 mL 无菌生理盐水中, 充分振摇混匀后取1.0
mL 于盛有9.0 mL 无菌生理盐水的试管中, 充分涡旋
混匀, 制成1:10 样品匀液, 按此操作进行10 倍梯度
稀释, 制备系列样品稀释匀液, 并取各稀释度的样品
稀释液1.0 mL 于无菌培养皿中, 加入冷却至40 ℃～
45 ℃的PDA 培养基15.0~20.0 mL, 充分混匀凝固后
倒置于 28 ℃±1 ℃培养 5 d 进行菌落计数。
菌相鉴定: 从培养皿中挑取待鉴定的真菌, 分
别接种至 PDA 或察氏培养基平板, 置 28 ℃±1 ℃培
养5 d 后, 观察并记录菌落生长速度、菌落形态、颜
色等特性, 同时挑取少许菌落制片, 在显微镜下观察
第4 期 韩春卉, 等: 2014 年山东临沂地区花生真菌及黄曲霉毒素污染调查 1385
并记录待鉴定真菌的显微下结构特征, 以对菌相进
行鉴定。
2.2.3 黄曲霉毒素测定
2.2.3.1 标准溶液的配制
黄曲霉毒素混合标准品(AFB1、AFB2、AFG1、
AFG2)配置: 取1 mL 混合标准品原液到10 mL 棕色
容量瓶中, 用HPLC 级甲醇涡旋后定容至刻度, 得到
浓度为260 μg/L(其中AFB1、AFB2、AFG1、AFG2
分别为100 μg/L、30 μg/L、100 μg/L、30 μg/L)的储
备液, 使用时, 用1: 1 的甲醇水溶液将上述储备液稀
释, 配制成质量浓度分别为130 μg/L、52 μg/L、26
μg/L、10.4 μg/L、2.6 μg/L 的系列混合标准工作溶液。
2.2.3.2 黄曲霉毒素的提取
将花生样品粉碎, 称取10 g 加40 mL 84: 16(V: V)
乙腈/去离子水, 200 r/min 震荡提取60 min 后3000
r/min 离心15 min, 玻璃纤维滤纸过滤调节pH 至6~8,
取2 mL 样品提取液与23 mL 1%吐温-20 PBS 缓冲液
涡旋混匀, 以1~2 滴/s 的流速通过免疫亲和柱, 10 mL
PBS 淋洗免疫亲和柱并抽干小柱, 纯甲醇洗脱免疫
亲和柱2 次, 每次0.5 mL, 收集洗脱液, 超纯水洗脱
免疫亲和柱2 次, 每次0.5 mL, 收集淋洗液与洗脱液
混合均匀, 取10 L 进行检测。
2.2.3.3 黄曲霉毒素的液相色谱检测
色谱柱: 反相C18(4.6 mm×150 mm, 5 m), 柱温
28 ℃; 流动相: 甲醇: 水(47: 53), 超声脱气; 流速:
1.0 mL/min; 荧光检测器: 激发波长360 nm, 发射波
长440 nm; 进样量: 10 L, 检出限为0.5 μg/kg, 不同
水平黄曲霉毒素的加标回收率范围为70%~80%。
3 结果与分析
3.1 2014 年临沂地区花生样品中真菌侵染及菌
相分布
5 个花生主产区花生样品的真菌侵染情况见表
1。临沂5 个花生主产区样品在收获前、收获期和贮
藏一个月后的真菌平均侵染率分别为: 28.9%、29.6%
和14.0%。不同时期采集的花生样品最常见的侵染真
菌为根霉、毛霉, 其次为绳状青霉、黑曲霉和黄曲霉。
3.2 2014 年临沂地区花生样品中黄曲霉侵染及
黄曲霉毒素检测情况
2014 年临沂5 个花生主产区花生样品中黄曲霉
的侵染情况见表2。100 份花生样本中有7 份样本检
出了黄曲霉, 其中4 份样本来自花生收获前, 3 份样
本来自花生收获后一个月。7 份样本中有6 份样本
来自沂水县。只在沂水地区贮藏一个月花生的一份
样本中检出黄曲霉毒素, 其中黄曲霉毒素B1(AFB1)
的含量为60.5 μg/L, 黄曲霉毒素B2(AFB2)的含量为
10.1 μg/L。
表1 2014 年临沂部分地区花生样品真菌菌相分析
Table 1 Fungi infection of peanut kernels from Linyi in 2014
收获前一个月 收获期 贮藏一个月
菌落数 沂水 临沭 莒南 沂南 平均(%) 沂水临沭平均(%) 沂水 临沭 平邑 平均(%)
污染率(%) 51.2 19.3 18.0 27.3 28.9 50.8 8.4 29.6 25.2 5.2 11.6 14.0
根霉 122 22 2 18 19.0 117 6 28.0 45 — 10 16.2
毛霉 122 28 4 14 13.7 121 7 21.4 44 1 11 16.2
绳状青霉 — 6 21 7 3.0 — 4 0.8 7 4 — 1.5
黑曲霉 — 1 — 9 1.0 — 2 0.4 10 2 — 1.6
黄曲霉 3 — — 1 0.4 — — — 3 — — 0.4
木霉 — — 1 — 0.1 1 2 0.6 2 — — 0.3
交链胞霉 — 1 — — 0.1 — — — 1 1 3 0.7
毛壳 2 — 4 — 0.6 — 2 0.4 1 — 1 0.3
其他霉菌 — — 10 15 2.5 — — — — — 2 0.3
注 “—”代表未检测到该菌。
1386 食品安全质量检测学报 第6 卷
3.3 2014 年临沂地区土壤样品真菌菌相分布
临沂花生主产区土壤样品中真菌菌相分布，见表
3。结果显示, 局限青霉、芽枝霉和根霉是临沂花生主
产区土壤中较常见的侵染真菌, 其次为绳状青霉、白
曲霉和毛霉; 黄曲霉侵染较低。从地区来看, 沂水花生
主产区土壤中的侵染真菌以芽枝霉、根霉和木霉为主,
临沭县的侵染真菌以局限青霉、芽枝霉和绳状青霉为
主, 莒南县的侵染真菌以局限青霉、根霉和绳状青霉为
主, 平邑县的侵染真菌以局限青霉、根霉和木霉为主,
沂南县的侵染真菌以局限青霉、芽枝霉和毛壳为主。
表2 2014 年临沂部分地区花生样品中黄曲霉侵染情况
Table 2 The infection of peanut kernels by A.flavus in Linyi in 2014
黄曲霉污染率%(阳性样品数/分析样品数)
收获前1 个月 收获期 储藏1 个月 储藏3 个月 平均检出率(%)
沂水 30(3/10) 0(0/10) 30(3/10) — 20(6/30)
临沭 0(0/10) 0(0/10) 0(0/10) — 0(0/30)
平邑 — — — 0(1/10) 0(0/10)
沂南 10(1/10) — — — 10(1/10)
莒南 0(0/10) — — — 0(0/10)
表3 临沂花生主产区土壤样品中真菌菌相分布
Table 3 The distribution of fungi isolated from soil in Linyi
真菌种类
菌相分布百分比(%)(目标菌落数/检出菌落总数)
沂水 临沭 莒南 平邑 沂南 平均
局限青霉 — 37.90(274/723) 20.90(28/134) 53.07(147/277) 18.26(40/219) 32.89
芽枝霉 8.96(12/134) 15.21(110/723) 2.24(3/134) 0.36(1/277) 27.40(60/219) 12.51
根霉 13.43(18/134) 6.92(50/723) 18.66(25/134) 18.05(50/277) 9.13(20/219) 10.96
绳状青霉 1.49(2/134) 12.45(90/723) 14.18(19/134) 3.25(9/277) 0.91(2/219) 8.20
白曲霉 — 9.27(67/723) 3.73(5/134) 5.05(14/277) 0.91(2/219) 5.92
毛霉 7.46(10/134) 6.92(50/723) 7.46(10/134) 3.61(10/277) 2.28(5/219) 5.72
木霉 19.40(26/134) — 3.73(5/134) 7.22(20/277) 2.28(5/219) 3.77
串珠镰刀菌 2.24(3/134) 4.29(31/723) 2.24(3/134) — 0.91(2/219) 2.62
毛壳 — 0.14(1/723) — — 14.61(32/219) 2.22
淡紫青霉 — — 17.91(24/134) — — 1.61
头孢霉 — 2.77(20/723) — 0.36(1/277) 0.46(1/219) 1.48
拟青霉 — 0.55(4/723) — 3.97(11/277) — 1.01
聚多曲霉 0.75(1/134) — 4.48(6/134) 1.44(4/277) 1.37(3/219) 0.87
帚霉 — 0.14(1/723) — — 4.57(10/219) 0.74
草酸青霉 — — — — 5.02(11/219) 0.74
结节青霉 — — 0.75(1/134) 3.61(10/277) — 0.74
犁头霉 — — — — 4.57(10/219) 0.67
黑曲霉 2.24(3/134) 0.14(1/723) — — 0.46(1/219) 0.34
黄曲霉 2.24(3/134) 0.14(1/723) — — — 0.27
常现青霉 — — 0.75(1/134) — 0.91(2/219) 0.20
酵母 — — 1.49(2/134) — — 0.13
橘青霉 — — — — 0.46(1/219) 0.07
橘灰青霉 — — 0.75(1/134) — — 0.07
其他青霉 — — — — 4.57(10/219) 0.67
其他霉菌 41.79(56/134) 3.18(23/723) 0.75(1/134) — 0.91(2/219) 5.51
注: “—”代表未检测到该菌。
第4 期 韩春卉, 等: 2014 年山东临沂地区花生真菌及黄曲霉毒素污染调查 1387
4 讨 论
花生是我国重要的油脂和食品原料, 也是我国
具有国际市场竞争力的出口创汇经济作物, 占全球
花生贸易量的30%以上[9]。基于黄曲霉毒素对消费者
健康风险, 欧盟对进口花生原料及制品中黄曲霉毒
素总量的限量由原来的20 μg/kg 和10 μg/kg 统一降
至4 μg/kg[10]。
本研究显示, 山东临沂花生主产区土壤中常见
的侵染真菌为局限青霉、芽枝霉和根霉, 与2012 年
同一地区的调查结果不同: 2012 年该地区土壤真菌
侵染以青霉、黑酵母、烟曲霉和黑曲霉为主。2014
年侵染花生的主要霉菌在收获前一个月以根霉和毛
霉为主, 收获期为根霉、毛霉和绳状青霉, 储藏一个
月后为根霉、毛霉、绳状青霉和黑曲霉, 而2012 年
花生收获前一个月以镰刀菌和根霉侵染为主, 收获
期为橘青霉和根霉, 储藏一个月后为橘青霉和黑曲
霉。尽管两次的调查发现真菌菌相不尽相同, 但花生
样品中黄曲霉的侵染水平总体较低。
由于土壤中真菌菌相和分布水平对花生样品中
同类真菌的污染影响较大。因此研究花生生长期间的
土壤中真菌菌相分布, 有助于花生中真菌及其毒素的
有效预防。本研究显示以临沂为代表的山东地区花生
产区土壤黄曲霉污染较低, 同时花生果实受到黄曲霉
侵染也较低。除了土壤中真菌菌相的影响外, 气候因
素也是影响真菌侵染花生及其制品的重要原因。一般
来说, 南方花生生产区受高温高湿气候条件影响, 是
黄曲霉及黄曲霉毒素多发和易发区, 而辽宁、山东、
河北、河南等北方地区花生不易受到黄曲霉毒素侵染
总体污染水平不高[11-15]。本研究结果证实山东地区花
生黄曲霉等产毒真菌和真菌毒素黄曲霉毒素的侵染水
平较低, 符合历年来山东地区花生样品调查结果。
综上分析, 山东临沂地区花生样品受黄曲霉菌
和黄曲霉毒素的侵染较轻, 土壤样品却易受其它真
菌侵染, 因此需要监测花生生长、贮藏期土壤的真菌
菌相变化。在花生的种植、采摘、贮藏过程中执行良
好的农业操作规范, 降低土壤中有害真菌侵染水平,
收获期避免荚果损伤而接触到污染的土壤等, 从而
预防花生中真菌及其毒素污染。
参考文献
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(责任编辑: 白洪健)
作者简介
韩春卉, 副主任技师, 主要研究方向
为食品卫生。
E-mail: hanchunhui@cfsa.net.cn
徐 进, 研究员, 主要研究方向为食
品微生物。
E-mail: xujin@cfsa.net.cn

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